Подготовка к стерилизации лабораторной посуды
Рис. 5. Подготовка пробирок с тампонами перед стерилизацией (слева) и хранение в закрывающемся шкафу ограниченный срок после стерилизации (справа).
Лабораторную посуду стерилизуют:
Оглавление:
- Подготовка к стерилизации лабораторной посуды
- ПРИНЦИПЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ ОБЪЕКТОВ, ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЫ И ИНСТРУМЕНТОВ
- Ветеринарная медицина
- Стерилизация лабораторной посуды
- Как стерилизовать лабораторную посуду.
- Методы стерилизации. Подготовка посуды, инструментов и материалов к стерилизации
- Стерилизация под действием температур
- ПРАВИЛА РАБОТЫ С АВТОКЛАВОМ
- ПРОВЕРКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕПЛОВОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ
- Стерилизация фильтрованием
- Стерилизация облучением
- Химическая стерилизация (дезинфекция)
- § 7. Практическая часть
а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180?С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.
б) в автоклаве при давлении 1 атм. В течениеминут
Рис. 6. Автоклав – аппарат для стерилизации паром под давлением.
ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА ДИСБАКТЕРИОЗА
Дисбактериоз (дисбиоценоз) -изменение количественного соотношения и состава нормальной микрофлоры организма, главным образом его кишечника, при котором происходит уменьшение количества или исчезновение обычно составляющих ее микроорганизмов и появление в большом количестве редко встречающихся или несвойственных ей микробов.
Показания для бактериологической диагностики дисбактериоза кишечника: длительно протекающие инфекции и расстройства, при которых не удается выделить патогенные энтеробактерии; затяжной период реконвалесценции после перенесенной кишечной инфекции; дисфункции ЖКТ на фоне или после проведенной антибиотикотерапии или у лиц, постоянно контактирующих с антимикробными препаратами. Исследования также следует проводить при болезнях злокачественного роста, у страдающих диспептическими расстройствами, лиц подготавливаемых к операциям на органах брюшной полости, недоношенных или травмированных новорожденных, а также при наличии бактериемий и гнойных процессов, трудно поддающихся лечению (язвенные колиты и энтероколиты, пиелиты, холециститы и др.).
Посевы изучают на наличие патогенных микроорганизмов и на нарушение соотношения различных видов микробов. Результаты исследования следует считать объективными при анализе роста изолированных колоний в том числе, если можно изучить морфологию и подсчитать количество колоний на чашку Петри. После идентификации проводят пересчет содержания микроорганизмов каждого вида на 1 г исследуемого материала. При обнаружении патогенной микрофлоры необходимо изучить ее чувствительность к антибактериальным препаратам и бактериофагам.
Отбор и доставка материала на дисбактериоз
Материалом для исследования является кал не позже 2 часов после дефекации.
Для получения достоверного результата стул должен быть обязательно утренним, самостоятельным, не на фоне лечения. У грудных детей забирать материал не с памперсов и пеленок.
Одну столовую ложку фекалий помещают в прокипяченную стеклянную баночку.
Лабораторная диагностика дисбактериоза кишечника
Метод исследования — бактериологический: мерный посев исследуемого материала с целью определения количества микроорганизмов наиболее значимых групп.
Источник: http://megaobuchalka.ru/6/35374.html
ПРИНЦИПЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ ОБЪЕКТОВ, ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД, ЛАБОРАТОРНОЙ ПОСУДЫ И ИНСТРУМЕНТОВ
Цель работы:познакомиться с принципами стерилизации микробиологических объектов, питательных сред, лабораторной посуды и инструментов
Стерилизация (от латинского слова sterilis — бесплодный) — обеспложивание, освобождение от всего живого. В микробиологической практике стерилизации подвергают инструменты, посуду, питательные среды и другие материалы, применяемые в работе.
Стерильность может быть достигнута при помощи физических и химических методов.
Стерилизация, в отличие от дезинфекции, предусматривает уничтожение в стерилизуемом объекте всех вегетативных и споровых, патогенных и непатогенных микроорганизмов. Стерилизацию производят различными способами: паром, сухим горячим воздухом, кипячением, фильтрацией и т. д. Выбор того или иного способа стерилизации определяется качеством и свойствами микрофлоры стерилизуемого объекта.
Подготовка и стерилизация лабораторного оборудования
Перед стерилизацией лабораторную посуду моют и сушат. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками. Поверх пробок на каждый сосуд (кроме пробирок) надевают бумажные колпачки.
Резиновые, корковые и стеклянные пробки стерилизуют в отдельном пакете, привязанном к горлышку посуды. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1—10 штук. Пастеровские пипетки по 3—15 шт. заворачивают в оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты, предупреждающий попадание материала в окружающую среду. При завертывании пипеток нужно соблюдать большую осторожность, чтобы не обломать запаянные концы капилляров. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.
В верхнюю часть градуированных пипеток, как и в пастеровские пипетки, вставляют предохранительную вату и затем заворачивают в плотную бумагу, нарезанную предварительно полосками шириной 2—2,5 см и длиной 50—70 см. Полоску кладут на стол, левый конец ее загибают и завертывают им кончик пипетки, затем, вращая пипетку, навертывают на нее ленту бумаги. Для того чтобы бумага не разворачивалась, противоположный конец ее закручивают или приклеивают. На бумаге надписывают объем завернутой пипетки. При наличии пеналов градуированные пипетки стерилизуют в них.
Лабораторную посуду стерилизуют:
а) сухим жаром при температуре 180°С и 160°С соответственно 1 ч и 150 минут.
б) в автоклаве при давлении 1,5 атм. в течение 60 минут, для уничтожения споровой микрофлоры – 90 минут при 2 атм.
Стерилизация шприцев. Шприцы стерилизуют в разобранном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микрофлорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) — 30 мин. Простерилизованный шприц собирают после того, как он остынет, в цилиндр вставляют поршень, надевают иглу, предварительно вынув из нее мандрен. Иглу, цилиндр и поршень берут пинцетом, который стерилизуют вместе со шприцем.
Стерилизация металлических инструментов. Металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) стерилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомендуется обертывать ватой.
Стерилизация бактериальных петель. Бактериальные петли, сделанные из платиновой или нихромовой проволоки, стерилизуют в пламени спиртовой или газовой горелки. Такой способ стерилизации получил название прокаливания или фламбирования.
Петлю в горизонтальном положении вносят в нижнюю, наиболее холодную, часть пламени горелки, чтобы не произошло разбрызгивания сжигаемого патогенного материала. После того как он сгорит, петлю переводят в вертикальное положение, накаливают докрасна вначале нижнюю, затем верхнюю часть проволоки и прожигают петледержатель. Прокаливание в целом занимает 5—7 с.
Подготовка к стерилизации и стерилизация бумаги, марли и ваты. Вату, марлю, фильтровальную бумагу стерилизуют в сухожаровой печи при температуре 160°С в течение часа от момента показания термометром данной температуры или в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.
Перед стерилизацией бумагу и марлю нарезают кусочками, а вату сворачивают в виде шариков или тампонов нужной величины. После этого каждый вид материала в отдельности по одной или несколько штук заворачивают в плотную бумагу. При разрыве пакета стерилизованный материал следует стерилизовать повторно, так как стерильность его нарушается.
Стерилизация перчаток и других резиновых изделий. Изделия из резины (перчатки, трубки и т. д.), загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе гидрокарбоната натрия или текучим паром в течение 30 минут; при загрязнении спороносной микрофлорой—в автоклаве при давлении 1,5—2 атм. в течение 30 или 20 минут. Резиновые перчатки перед стерилизацией внутри и снаружи пересыпают тальком для предохранения их от склеивания. Между перчатками прокладывают марлю. Каждую пару перчаток завертывают отдельно в марлю и в таком виде помещают в биксы.
Стерилизация патогенных культур микробов. Пробирки и чашки, содержащие культуры микробов, не нужные для дальнейшей работы, складывают в металлический бак, пломбируют крышку и сдают на стерилизацию. Культуры патогенных микробов, вегетативные формы, убивают в автоклаве в течение 30 минут при давлении 1 атм. Сдача баков для стерилизации в автоклавную производится специально выделенным лицом под расписку. Режим стерилизации регистрируется в специальном журнале. При уничтожении культур микробов I и II групп патогенности, а также материала, зараженного или подозрительного на зараженность возбудителями, отнесенными к этим группам, баки с отработанным материалом переносят на металлических подносах с высокими бортами в присутствии сопровождающего лица, допущенного к работе с заразным материалом.
Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторе. В стерилизатор наливают дистиллированную воду, так как водопроводная образует накипь. (Стеклянные предметы погружают в холодную, металлические предметы—в горячую воду с добавлением гидрокарбоната натрия). Стерилизуемые предметы кипятят на слабом огнеминут. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения инструменты берут стерильным пинцетом, который кипятят вместе с остальными предметами.
Стерилизация сухим жаром.
Стерилизация сухим жаром производится в печи Пастера. Подготовленный к стерилизации материал кладут на полки так, чтобы он не соприкасался со стенками. Шкаф закрывают и после этого включают обогрев. Продолжительность стерилизации при температуре 150°С 2 ч, при 165°С – 1 ч, при 180°С – 40 мин, при 200°С –мин (при 170°С бумага и вата желтеют, а при более высокой температуре обугливаются). Началом стерилизации считается тот момент, когда температура в печи достигнет нужной высоты. По окончании срока стерилизации печь выключают, но дверцы шкафа не открывают до полного охлаждения, так как холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование трещин на горячей посуде.
Стерилизация паром под давлением.
Стерилизацию паром под давлением производят в автоклаве. Автоклав состоит из двух котлов, вставленных один в другой, кожуха и крышки. Наружный котел называют водопаровой камерой, внутренний — стерилизационной камерой. В водопаровом котле происходит образование пара. Во внутренний котел помещают стерилизуемый материал. В верхней части стерилизационного котла имеются небольшие отверстия, через которые проходит пар из водопаровой камеры. Крышка автоклава герметически привинчивается к кожуху. Кроме перечисленных основных частей, автоклав имеет ряд деталей, регулирующих его работу: манометр, водомерное стекло, предохранительный клапан, выпускной, воздушный и конденсационный краны. Манометр служит для определения давления, создающегося в стерилизационной камере. Нормальное атмосферное давление (760 мм рт. ст.) принимается за нуль, поэтому в неработающем автоклаве стрелка манометра стоит на нуле. Между показаниями манометра и температурой имеется определенная зависимость (табл.1).
Таблица 1. Соотношения показаний манометра и температуры кипения воды
Красная черта на шкале манометра определяет максимальное рабочее давление, которое допускается в автоклаве. Предохранительный клапан служит для предохранения от чрезмерного повышения давления. Его устанавливают на заданное давление, то есть, давление, при котором нужно производить стерилизацию, при переходе стрелки манометра за черту клапан автоклава автоматически открывается и выпускает лишний пар, замедляя тем самым дальнейший подъем давления.
На боковой стенке автоклава имеется водомерное стекло, показывающее уровень воды в водопаровом котле. На трубке водомерного стекла нанесены две горизонтальные черты — нижняя и верхняя, обозначающие соответственно допускаемый нижний и верхний уровень воды в водопаровой камере. Воздушный кран предназначен для удаления воздуха из стерилизационной и водопаровой камер в начале стерилизации, так как воздух, являясь плохим проводником тепла, нарушает режим стерилизации. На дне автоклава находится конденсационный кран для освобождения стерилизационной камеры от конденсата, образующегося в период нагревания стерилизуемого материала.
Правила работы с автоклавом.
Перед началом работы осматривают автоклав и контрольно-измерительную аппаратуру. В автоклавах с автоматическим регулированием пара на электровакуумном манометре водопаровой камеры стрелки устанавливают в соответствии с режимом стерилизации: нижнюю стрелку ставят на 0,1 атм. ниже, верхнюю—на 0,1 атм. выше рабочего давления, водопаровую камеру заполняют водой до верхней отметки мерного стекла. В период заполнения водой вентиль на трубе, по которой пар поступает в камеру, держат открытым для свободного выхода воздуха из котла. Стерилизационную камеру автоклава загружают стерилизуемым материалом. После этого крышку (или дверцу) автоклава закрывают, плотно закрепляя центральным затвором или болтами; чтобы избежать перекоса, болты завинчивают крест-накрест (по диаметру). Затем включают источник подогрева (электрический ток, пар), закрывая вентиль на трубе, соединяющей источник пара со стерилизационной камерой. С началом парообразования и создания давления в водопаровой камере производят продувку (удаление воздуха из стерилизационного котла). Способ удаления воздуха определяется конструкцией автоклава. Вначале воздух выходит отдельными порциями, затем появляется ровная непрерывная струя пара, указывающая, что из стерилизационной камеры воздух полностью вытеснен. После удаления воздуха кран закрывают, и в стерилизационной камере начинается постепенное повышение давления.
Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. После этого интенсивность подогрева уменьшают, чтобы давление в автоклаве в течение нужного времени оставалось на одном уровне. По окончании времени стерилизации подогревание прекращают. Закрывают вентиль в трубопроводе, подающем пар в стерилизационную камеру, и открывают вентиль на конденсационной (нисходящей) трубе для снижения давления пара в камере. После падения стрелки манометра до нуля медленно ослабляют прижимные приспособления и открывают крышку автоклава.
Температура и продолжительность стерилизации определяются качеством стерилизуемого материала и свойствами тех микроорганизмов, которыми он заражен.
Контроль температуры в стерилизационной камере осуществляется периодически с помощью бактериологических тестов. Биотесты изготовляются бактериологическими лабораториями ЦСЭН. В случае непрохождения данных тестов производят проверку технического состояния автоклава.
Стерилизация текучим паром.
Стерилизация текучим паром производится в текучепаровом аппарате Коха или в автоклаве при незавинченной крышке и открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняют на 2/3 водой (для спуска оставшейся после стерилизации воды есть кран). Крышка аппарата имеет в центре отверстие для термометра и несколько небольших отверстий для выхода пара. Стерилизуемый материал загружают в камеру аппарата неплотно, чтобы обеспечить возможность наибольшего контакта его с паром. Началом стерилизации считается время с момента закипания воды и поступления пара в стерилизационную камеру. В текучепаровом аппарате стерилизуют, главным образом, питательные среды, свойства которых изменяются при температуре выше 100°С. Стерилизацию текучим паром следует проводить повторно, так как однократное прогревание при температуре 100°С не обеспечивает полного обеззараживания. Такой метод получил название дробной стерилизации: обработку стерилизуемого материала текучим паром проводят по 30 минут ежедневно в течение 3 дней. В промежутках между стерилизациями материал выдерживают при комнатной температуре для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях.
Тиндализация—дробная стерилизация с применением температуры ниже 100°С, предложенная Тиндалем. Прогревание стерилизуемoгo материала производят в водяной бане, снабженной терморегулятором, по часу при температуре 60—65°С в течение 5 дней или при 70— 80°C в течение 3 дней. В промежутках между прогреваниями обрабатываемый материал выдерживают при температуре 25°С для прорастания спор в вегетативные формы, которые погибают при последующих прогреваниях. Тиндализацией пользуются для обеспложивания питательных сред, содержащих белок.
Механическая стерилизация с помощью бактериальных ультрафильтров. Бактериальные фильтры применяют для освобождения жидкости от находящихся в ней бактерий, а также для отделения бактерий от вирусов, фагов и экзотоксинов. Вирусы бактериальными фильтрами не задерживаются, и поэтому ультрафильтрацию нельзя рассматривать как стерилизацию в принятом значении этого слова. Для изготовления ультрафильтров применяют мелкопористые материалы (каолин, асбест, нитроцеллюлоза и др.), способные задерживать бактерии.
Асбестовые фильтры (фильтры Зейтца) представляют собой асбестовые пластинки толщиной 3—5 мм и диаметром 35 и 140 мм для фильтрации малых и больших объемов жидкости. В нашей стране асбестовые фильтры, изготовляют двух марок: «Ф» (фильтрующие), задерживающие взвешенные частицы, но пропускающие бактерии, и «СФ» (стерилизующие), более плотные, задерживающие бактерии. Перед употреблением асбестовые фильтры монтируют в фильтровальные аппараты и вместе с ними стерилизуют в автоклаве. Асбестовые фильтры используются однократно. Мембранные ультрафильтры изготавливаются из нитроцеллюлозы и представляют собой диски белого цвета диаметром 35 мм и толщиной 0,1 мм.
Бактериальные фильтры различаются по величине пор и обозначаются порядковыми номерами (табл. 2).
Таблица 2 Бактериальные фильтры
Непосредственно перед употреблением мембранные фильтры стерилизуют кипячением. Фильтры помещают в дистиллированную воду, подогретую до температуры 50— 60°С, чтобы предупредить их скручивание, кипятят на слабом огне в течение 30 минут, меняя 2—3 раза воду. Простерилизованные фильтры во избежание их повреждения вынимают из стерилизатора фламбированным и остуженным пинцетом с гладкими кончиками.
Для фильтрации жидкостей бактериальные фильтры монтируют в специальные фильтровальные приборы, в частности, в фильтр Зейтца.
Он состоит из 2-х частей: верхней, имеющей форму цилиндра или воронки, и нижней—опорной части аппарата, с так называемым фильтровальным столиком из металлической сетки или чистой керамической пластинки, на которую помещают мембранный или асбестовый фильтр. Опорная часть аппарата имеет форму воронки, суживающаяся часть которой находится в резиновой пробке горлышка колбы Бунзена. В рабочем состоянии верхнюю часть прибора фиксируют на нижней с помощью винтов. Перед началом фильтрации места соединения различных частей установки для создания герметичности заливают парафином. Отводную трубку колбы присоединяют толстостенной резиновой трубкой к водоструйному, масляному или велосипедному нacocy. После этого в цилиндр или воронку аппарата наливают фильтруемую жидкость и включают насос, создающий вакуум в приемном сосуде. В результате образующейся разности давлений фильтруемая жидкость проходит через поры фильтра в приемник. Микроорганизмы остаются на поверхности фильтра.
Ветеринарная медицина
Стерилизация лабораторной посуды
Как стерилизовать лабораторную посуду.
Для работы в бактериологической лаборатории используют Лабораторную посуду: Чашки Петри, пробирки различного размера, пастеровские пипетки, колбы, бактериологические петли, инструменты, предметные и покровные стекла, карандаш по стеклу (стеклограф), стерилизаторы, дистилляторы и т. п.
Посуду моют в специально оборудованных мойках. Новую посуду кипятят в 1 %-ном растворе пищевой соды или мыльной воде в течениемин, промывают водой, помещают на несколько часов в слабый раствор соляной кислоты, затем тщательно ополаскивают дистиллированной водой. Посуду, бывшую в употреблении, выдерживают в течение 2 ч в смеси серной кислоты с дихроматом калия (100 частей кислоты, 50 частей дихромата калия на 1000 частей воды), затем моют ершами в горячей воде, кипятят в мыльной воде или в 1 %-ном растворе гидрокарбоната натрия и тщательно прополаскивают. Вымытую посуду помещают в сушильный шкаф. Предметные стекла после мойки протирают чистой полотняной салфеткой и хранят в склянках с притертой пробкой в смеси спирта и эфира или хорошо завернутыми в чистую бумагу.
Посуду для стерилизации готовят следующим способом. Пробирки, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками, завертывают по 10— 15 шт. в бумагу. На колбы надевают бумажные колпачки, перевязывают от попадания пыли.
В один конец градуированных пипеток вставляют ватный тампон, затем вращательным движением обматывают длинной тонкой полоской бумаги шириной 4-5 см. При этом концы пипеток должны быть тщательно завернуты бумагой.
В концы пастеровских пипеток вставляют ватные тампоны, а затем по несколько штук завертывают в бумагу или помещают в специальные пеналы.
Чашки Петри завертывают по 3-4 шт. в бумагу и стерилизуют в сушильном шкафу или в автоклаве.
Колбы и пробирки, закрытые ватно-марлевыми пробками, мясо-пептонного бульона, агара и других сред помещают в стерилизующий аппарат.
Лабораторную посуду, питательные среды и другие материалы стерилизуют.
Стерилизация — Это полное уничтожение всех микроорганизмов (патогенных и сапрофитных) на стерилизуемом объекте.
Стерилизацию проводят различными методами: кипячением, паром под давлением (в автоклавах), текучим паром (в аппаратах Коха), сухим жаром (в печах Пастера), фильтрованием материала через бактериальные фильтры, прокаливанием на пламени горелки и др.
Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторах. Кипячением обычно стерилизуют инструменты в течениемин. Однако при этом методе не всегда достигают полного уничтожения микробов. Споры некоторых микроорганизмов выдерживают кипячение более 3 ч.
Прокаливание на пламени применяют для стерилизации бактериологических петель, игл, скальпелей, ножниц, пинцетов и др.
Пастеризация — Это термическая обработка продуктов при температуре ниже 100 °С с последующим быстрым охлаждением до 6-9 °С.
При пастеризации погибают неспоровые микроорганизмы, уменьшается общее количество микробов. Пастеризацию проводят при различных режимах: длительная при»С в течениемин; кратковременная при 75 °С от нескольких секунд до 5 мин; моментальная при°С без выдержки. Охлаждение стерилизуемого продукта необходимо для того, чтобы предотвратить прорастание в вегетативные клетки спор, сохранивших жизнеспособность после однократного прогревания.
Стерилизацию и пастеризацию проводят в различных стерилизующих аппаратах.
Источник: http://veterinarua.ru/laboratornye-raboty/472-sterilizatsiya-laboratornoj-posudy.html
Методы стерилизации. Подготовка посуды, инструментов и материалов к стерилизации
Полное освобождение любого материала от живых микроорганизмов и их покоящихся форм называется стерилизацией, или обеспложиванием. В основу стерилизации положена способность определенных факторов вызывать гибель микроорганизмов и их спор. Агенты, вызывающие гибель микробных клеток, называются бактерицидными. В качестве стерилизующих используются прежде всего те из них, для которых не возникает необходимость последующего их удаления с обрабатываемого материала. К таким агентам относятся высокая температура, лучевая энергия, некоторые летучие химические соединения. Жидкости можно освободить от микробов фильтрованием.
Стерилизация под действием температур
Наиболее часто для стерилизации используют высокие температуры, вызывающие гибель клеток микроорганизмов. Действие на микроорганизмы низких температур (–190°C в жидком азоте или при –252°С в жидком кислороде) не вызывает значительных изменений в их клетках. Эффективность бактерицидного действия температурного фактора зависит от степени нагревания, продолжительности воздействия данной температуры, вида микроорганизма, а также от состава среды, в которой он находится. Для уничтожения вегетативных форм большинства микробов достаточно температуры в пределах 61,5-85°С и экспозиции соответственно от 30 до 3 мин. Споры бактерий погибают при температуре выше 100° С. Следует помнить, что при снижении влажности устойчивость бактерий и их спор к высоким температурам повышается. Так, в условиях влажного жара споры гибнут при°С в течениемин, а в условиях сухого жара – при 180° С и экспозиции 45 мин.
Микроорганизмы существенно отличаются по чувствительности к действию температуры, что, по-видимому, можно объяснить различной организацией их клеток и, прежде всего, их оболочек. Так, необратимые процессы в клетках пневмококков начинаются при температуре 45-50° С, а в клетках стафилококков – при 60-70° С. В то же время ряд термофильных бактерий Methanobacterium thermoautotrophicum, Thermoactinomyces vulgaris и других вегетируют при температуре 60 – 70 0 С и даже при более высоких. Гибель микроорганизмов под действием высоких температур наступает вследствие денатурации клеточных белков. Помимо этого высокие температуры разрушают осмотический барьер клеток, нарушают равновесие ферментативных реакций и пр.
Стерилизация под действием высоких температур может осуществляться различными способами: прокаливанием в пламени горелки, кипячением, пастеризацией, сухим жаром, влажным жаром, насыщенным паром под давлением (автоклавирование).
Фламбированием (прокаливанием в пламени горелки) стерилизуют бактериологические петли, бактериологические иглы, кончики пинцетов, пробочные сверла и некоторые металлические предметы. В микробиологической практике часто пользуются бактериологической петлей, которая служит для забора микробного материала. Изготавливается бактериологическая петля из платиновой или нихромовой проволоки длиной 8-10 см, один конец которой загнут в виде круга, другой закрепляется в специальном металлическом держателе.
Стерилизацию кипячением производят в стерилизаторе на слабом огне, чтобы избежать разбрызгивания жидкости. Началом стерилизации считается момент закипания воды в стерилизаторе. По окончании кипячения воду сливают и инструменты берут стерильным пинцетом. Кипячением стерилизуют шприцы (в разобранном виде), металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты), резиновые перчатки и пробки и пр. Инструменты, содержащие металлические части, стерилизуют в 2%-м растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины.
Пастеризация (неполная стерилизация) – это уничтожение в материале только вегетативных клеток микроорганизмов. С этой целью его подвергают воздействию температуры 75-80° С в течение 5-10 мин. Пастеризуют чаще всего продукты питания (молоко, соки, ягоды, фрукты, вина и т.д.), которые при воздействии высоких температур теряют свои вкусовые и пищевые качества. При пастеризации гибнут споры грибов, вегетативные клетки бактерий, в том числе и патогенных, тогда как бактериальные эндоспоры остаются жизнеспособными. Их прорастанию при хранении продуктов препятствуют низкие значения рН, высокие концентрации сахара, отсутствие кислорода и некоторые другие факторы.
Стерилизация сухим жаром осуществляется в сушильных шкафах. Наиболее часто в лабораториях используется электрический сушильный шкаф 2В-151. Он состоит из корпуса, в котором находится цилиндрическая рабочая камера. В камере расположены съемные рабочие полки. Шкаф обогревается при помощи нагревательной проволоки, намотанной на термостойкую пластинку, находящуюся на наружной поверхности камеры. Пространство между стенками корпуса и рабочей камеры заполнено термоизоляционным материалом. В шкаф вмонтирован термометр. Обогрев регулируется при помощи автоматического терморегулятора.
Максимальная температура в сушильном шкафу достигает 200°С. Горячим воздухом в сушильном шкафу чаще всего стерилизуют стеклянную посуду (пробирки, воронки, пипетки, стаканы, конические колбы Эрленмейера, колбы Бунзена, шприцы и т.д.). Перед стерилизацией посуду моют, сушат и заворачивают в бумагу, при этом пробирки и колбы закрывают ватно-марлевыми пробками.
Продолжительность стерилизации при температуреС — 2 ч, при– 1ч, при– 40 мин, а приС –мин. При стерилизации споры бактерий переносят высокую температуру в течение длительного времени.
Следует иметь в виду, что при температуреС бумага и вата желтеют, а при более высоких температурах – обугливаются. По окончании стерилизации сушильный шкаф выключают, но дверцы его не открывают до полного охлаждения, т.к. холодный воздух, поступающий внутрь шкафа, может вызвать образование трещин на горячей посуде.
Стерилизация влажным паром (текучим паром) или дробная стерилизация (тиндализация) производится в аппарате Коха или в автоклаве при открытом выпускном кране. Аппарат Коха представляет собой металлический полый цилиндр с двойным дном и электронагревательным устройством. Пространство между верхней и нижней пластинками дна заполняется на 2/3 водой. В крышке аппарата вмонтирован термометр и имеется отверстие для выхода пара. В аппарате Коха стерилизуют главным образом питательные среды, свойства которых изменяются при температурах вышеС. Обработку материала текучим паром используют для проведения дробной стерилизации. При этом материал, чаще всего питательные среды, подвергается трех- или четырехкратной обработке влажным жаром в течение одного часа при температуре 56 – 75 0 С с интервалом 24 часа, в течение которых поддерживается температура, благоприятная для прорастания спор. Проросшие из спор вегетативные клетки быстро погибают при очередном нагревании материала.
Стерилизация влажным жаром под давлением (автоклавирование) основана на прогревании какого-либо материала насыщенным паром при давлении выше атмосферного. Известно, что температура насыщенного пара зависит от давления – с повышением давления его температура возрастает. В связи с тем, что с увеличением давления температура кипения жидкостей возрастает, появляется возможность стерилизовать их приС и выше, не допуская кипения и, следовательно, испарения и разбрызгивания. Продолжительность стерилизации паром под давлением зависит от химического состава стерилизуемого материала, видов микробов, находящихся в нем, а также от объёма (теплоёмкости) сосудов, в которых проводят стерилизацию. Условия повышенного давления насыщенного пара создают в специально герметически закрывающихся толстостенных аппаратах — автоклавах. Они бывают различной конструкции, но принципиальная схема их одна и та же. Эти две камеры – большая (рабочая или стерилизационная) и маленькая (водопаровая), сообщающиеся между собой трубопроводом с вентилем. Водопаровая камера сообщается также с внешней средой трубкой с водомерным стеклом, краном и воронкой, через которую она заполняется дистиллированной водой. Рабочая камера, в которую помещают стерилизуемый материал, снабжена краном для выхода воздуха, манометром для определения давления пара и предохранительным клапаном для выхода пара при чрезмерном повышении давления.
ПРАВИЛА РАБОТЫ С АВТОКЛАВОМ
В рабочую камеру помещают материал для стерилизации, а в водопаровую камеру наливают воду с таким расчетом, чтобы уровень ее в водомерной трубке был между верхней (максимальной) и нижней (минимальной) чертой. Крышку автоклава привинчивают к корпусу, завинчивая болты попарно во избежание перекоса крышки. Открывают краны и включают источник обогрева. Когда пар из выпускного крана начинает выходить непрерывной струей, кран закрывают и наблюдают за повышением давления по манометру.
Нагревание воды в водопаровой камере осуществляется с помощью вмонтированных в нее электродов и регулируется автоматически. Началом стерилизации считается тот момент, когда стрелка манометра показывает заданное давление. Это давление поддерживают путем регулирования подогрева. Между показаниями манометра и температурой кипения воды существует следующая зависимость:
Показатели манометра, атм: Температура кипения воды, 0 С:
0 (760 мм рт.ст.) 100
По окончании времени стерилизации подогрев прекращают. Необходимо дождаться, когда давление в автоклаве сравняется с атмосферным. Затем постепенно открывают кран, выводящий пар. Только после падения давления до нуля и выхода пара медленно отвинчивают болты крышки автоклава (снова крест-накрест), открывают крышку, ориентируя ее на себя для защиты от выходящего пара. Если во время стерилизации давление начинает подниматься выше заданного уровня, уменьшают нагрев или выпускают часть пара через предохранительный клапан. Для работы с автоклавом допускаются лица, прошедшие специальное обучение.
ПРОВЕРКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ТЕПЛОВОЙ СТЕРИЛИЗАЦИИ
Поскольку при автоклавировании бактерицидное действие оказывают высокие температуры и насыщенный пар, а у большинства автоклавов (по соображениям простоты и безопасности) вмонтированы только манометры, каждый раз возникает необходимость убедиться в том, что материал подвергся воздействию стерилизующей температуры в течение достаточно длительного времени. Контроль температуры в автоклавах осуществятся при помощи специальных термоиндикаторов – термочувствительных красок, изменяющих окраску после воздействия стерилизующей температуры, или веществ (сера, сахар), плавящихся только при определенных температурах.
Контроль эффективности бактерицидного действия высоких температур осуществляют, помещая вместе с материалом, подлежащим стерилизации, полоски бумаги, на которые нанесены споры устойчивых к нагреванию бактерий, например, Bacillus subtilis или ампулы, содержащие споры В. stearothermophilus, которые относятся к числу наиболее термоустойчивых. После окончания стерилизации полоски бумаги или ампулы помещают в условия, благоприятные для прорастания спор.
Стерилизация фильтрованием
Многие компоненты жидких питательных сред термолабильны и быстро разрушаются под воздействием высоких температур, поэтому жидкие питательные среды и другие жидкие материалы удобнее всего (значительно быстрее и эффективнее дробной стерилизации) стерилизовать фильтрованием. Впервые стерилизация жидкостей фильтрованием была проведена Шамберланом, учеником Пастера. Он изготовил фарфоровый фильтр, представляющий собой полый цилиндр, закрытый с одного конца и напоминающий свечу – свеча Шамберлана. Фильтр задерживает самые мелкие из всех известных бактерий. Для стерилизации питьевой воды используют фильтр Беркефельда – свеча Беркефельда. Стенки свеч Шамберлана и Беркефельда состоят из глинозема, фарфора или кизельгура. Эти материалы несут положительный электрический заряд, в то время как бактерии заряжены отрицательно. Таким образом, механизм фильтрации через свечи заключается не в «просеивающем» их действии, а носит адсорбирующий характер. К адсорбирующим относятся также фильтры, изготовленные из глины, асбеста и некоторых других материалов. Поры этих фильтров больше, чем размеры бактерий.
В настоящее время в микробиологической практике широко применяются асбестовые и стеклянные фильтры. Асбестовые фильтры представляют собой пластинки толщиной 3–5 мм и диаметром 35 и 140 мм. Для стерилизации используют отечественные фильтры марки «СФ» (стерилизующий фильтр). Перед употреблением асбестовые пластинки монтируют в специальный аппарат – прибор Зейтца, состоящий из двух частей: металлического или стеклянного полого цилиндра и нижней части с опорной сеткой. На опорную сетку кладут асбестовый фильтр и обе части аппарата соединяют винтами или зажимами. На трубку нижней части аппарата одевается резиновая пробка, посредством которой он вставляется в колбу Бунзена, приготовленный таким образом прибор Зейтца обертывают в бумагу и стерилизуют в автоклаве. Стерилизуемую жидкость наливают в цилиндр и соединяют боковой отросток колбы Бунзена с вакуум-насосом. В результате образующейся разности давлений жидкость проходит через асбестовый фильтр в приемник (колбу). В аппарат Зейтца могут монтироваться также стерилизующие стеклянные и мембранные фильтры.
Вследствие малого размера пор и высокого поверхностного натяжения, возникающего при соприкосновении с жидкостью, с нитроцеллюлозными фильтрами работают, используя давление или разрежение. Чтобы уменьшить гидрофобность фильтров, в них вводят детергент (поверхностно-активное вещество), а во избежание высушивания обрабатывают глицерином.
Непосредственно перед применением мембранные фильтры стерилизуют кипячением. Их помещают в дистиллированную воду, подогретую до температуры 50-60° С, и, чтобы предупредить скручивание, кипятят на слабом огне в течение 30 мин, меняя 2–3 раза воду. При этом с пластинки фильтра удаляется глицерин. Стерильные фильтры во избежание их повреждения вынимают из стерилизатора фламбированным (стерильным) остуженным пинцетом с гладкими кончиками. Мембранные пластинки, как и асбестовые, монтируются в специальные фильтровальные аппараты, в том числе и аппарат Зейтца.
В настоящее время для стерилизации применяются также молекулярные фильтры, которые отделяют малые макромолекулы от больших и эффективно задерживают вирусные частицы. В качестве молекулярных фильтров используются мембраны «Диафло» или «Пелликон», выпускаемые американскими фирмами, а также отечественные ядерные фильтры (ядерные сита). Последние представляют собой тонкие лавсановые пленки с калиброванными тяжелыми ионами отверстиями, которые крепятся на более толстом поддерживающем слое с губчатой структурой. Диапазон молекулярных масс пропускаемых молекул варьирует от 500 додальтон.
Стерилизация облучением
На клетки бактерий летальный эффект оказывают ультрафиолетовые, рентгеновские, гамма-, альфа-, бета-лучи и нейтроны. В лабораторных условиях обычно используют ультрафиолетовые лучи, источником которых являются бактерицидные лампы. Излучателем в них служит электрическая дуга, возникающая в парах ртути низкого давления и испускающая линейчатый спектр в ультрафиолетовой области, более 80% энергии которого приходится на длину волны 253,7 нм. Бактерицидные лампы, применение которых ограничено из-за малой проникающей способности, используют для частичной стерилизации открытых поверхностей и воздуха помещений. Вегетативные формы более чувствительны к облучению, чем споры. Ультрафиолетовые лучи вызывают острое воспаление роговицы глаз, поэтому работают с кварцевыми лампами в защитных очках.
Химическая стерилизация (дезинфекция)
Дезинфекция представляет собой удаление или разрушение патогенных микроорганизмов, находящихся на неживых объектах, с помощью химических агентов – дезинфицирующих веществ. Она проводится, когда невозможно применить стерилизацию паром или другими физическими методами.
Бактерицидное действие химических агентов обусловлено активностью функциональных групп, концентрацией активного компонента вещества, длительностью контакта, рН, температурой, влажностью и присутствием органического вещества.
Галогены и их производные (хлор, йод и др.). Основой хлорных дезинфицирующих веществ является гипохлорит натрия, широко применяются хлорамины, получаемые путем замещения хлором водорода аминовых или иминовых групп. Используются спиртовый раствор (настойка) йода или его производное (йодофор-вескодин). Хлор и йод активны против всех бактерий и их спор, но они активно соединяются с белком, поэтому в его присутствии их следует брать в избытке.
Соединения тяжелых металов (ртути – хлорид ртути (II), оксицианид ртути, а также серебра, меди) в большей степени оказывают бактериостатическое действие.
Фенольные соединения (о-фенилфенол) эффективны против вегетативных клеток в больших разведениях, но часто неэффективны против бактериальных спор.
Спирты (этиловый, изопропиловый) содержат гидроксильные группы, придающие им бактерицидные свойства. Дезинфицирующие свойства спиртов увеличиваются прямо пропорционально концентрации от 50 до 70 0 . Спирты не вызывают гибели спор и обладают медленным обеззараживающим действием.
Микрооцидные газы (формальдегид, окись этилена, пропиолактон). Формальдегид обладает выраженной спороцидной активностью, но острым раздражающим запахом и способностью образовывать на поверхности стерилизуемого органического материала слой свернувшегося вещества, защищающий находящиеся внутри микроорганизмы. Максимальный стерилизующий эффект отмечается при относительной влажности 70% и температуре 22 0 С. При низких температурах формальдегид теряет активность. Окись этилена, используемая в виде газовой смеси, в которой на ее долю приходится от 2 до 50%, а вторым компонентом является азот или углекислота, эффективно убивает вегетативные клетки и споры бактерий. Окись этилена не оказывает вредного действия на органические материалы, легко повреждающиеся при нагревании, поэтому ее применяют для стерилизации питательных сред, содержащих термолабильные компоненты. Окись этилена токсична, нестойкая и распадается в водных растворах, образуя этиленгликоль, а также взрывоопасна.
§ 7. Практическая часть
Подготовка к стерилизации лабораторной посуды
1. Перед стерилизацией лабораторную посуду тщательно моют и сушат.
2. Пробирки, флаконы, бутыли, матрацы, колбы закрывают ватно-марлевыми пробками.
3. Чашки Петри стерилизуют завернутыми в бумагу по 1— 5 штук или в пеналах.
4. Пастеровские пипетки по 3—5—10—15 штук заворачивают в плотную оберточную бумагу. В верхнюю часть каждой пипетки вкладывают кусочек ваты. Во время работы пипетки из пакета вынимают за верхний конец.
Лабораторную посуду стерилизуют:
а) сухим жаром при температуре 150, 160 и 180°С соответственно 2 часа, 1 час и 30 минут.
б) в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 20—30 минут.
Стерилизация металлических инструментов
Ножницы, скальпели, пинцеты и пр. стерилизуют в 2% содовом растворе (сода предупреждает появление ржавчины и потерю остроты). Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в воду рекомендуется обертывать ватой.
Стерилизация перчаток и других резиновых изделий
Перчатки, шланги, трубки и другие, загрязненные вегетативной формой микробов, стерилизуют кипячением в 2% растворе соды или текучим паром 30 минут; при загрязнении спороносной патогенной микрофлорой — в автоклаве при давлении 1 атм. в течение 30 минут.
Приготовление дезрастворов группы хлора
1. Хлорная известь обладает высоким бактериальным действием. Ее используют в микробиологической практике в виде порошка, 10—20% хлорно-известкового молока и 0,2—10% осветленного раствора.
2. Схема приготовления хлорно-известкового молока.
Концентрация хлорно-нзвсстко-вого молока (в %)
Количество хлорной извести в граммах на 10 л воды при содержании в ней активного хлора (в %)
В таблице показана взаимосвязь между содержанием активного хлора в хлорной извести и ее количеством, необходимым для приготовления 10 л хлорно-известкового молока 10—20% концентрации.
3. Хлорамин — содержит 25—26,5% активного хлора.
В микробиологических лабораториях пользуются 0,2— 10% растворами хлорамина.
Концентрация раствора (в%)
Количество хлорамина в 1 г на:
Приготовление маточного раствора хлорной извести
1. Взять емкость (стеклянные бутыли темного стекла с притертой пробкой, эмалированная или стеклянная посуда) и поместить в нее 1 кг сухой хлорной извести, после чего, продолжая помешивать, добавить постепенно небольшое количество воды до получения кашицеобразной массы. И затем, перемешивая, добавить воду до объема 10 литров, т. е. для приготовления 10% р-ра хлорной извести необходимо взять: 1 кг сухой хлорной извести + 9 литров воды = = 10 литрам раствора.
2. Свежеприготовленные растворы оставляют на 24 часа в прохладном темном помещении в закрытой посуде. Через 24 часа осторожно, не взбалтывая осадка, сливают осветленный раствор в другую емкость (стеклянные емкости темного цвета, эмалированная или пластмассовая посуда) для хранения до 10 дней.
3. При приготовлении маточного раствора на емкости (на этикетке, которая крепится на ней) указывается дата приготовления, концентрация раствора, должность, фамилия лица, приготовившего раствор.
Внимание! Использование оцинкованной посуды запрещено. Дезрастворы группы фенола
1. Карболовая кислота. Жидкая карболовая кислота содержит 90% кристаллического фенола и 10% воды. В микробиологических лабораториях используют 3—5 % растворы карболовой кислоты.
Схема приготовления растворов карболовой кислоты
2. Хромовая смесь. Пропись приготовления:
В колбу наливают 150 мл концентрированной серной кислоты, туда же всыпают 25 г двухромовокислого калия. Полученную смесь оставляют стоять до растворения. Через сутки раствор темно-оранжевого цвета может быть применен для мытья посуды. Перед употреблением смесь надо подогреть до 45—50°С. Если цвет смеси меняется на темно-зеленый, это говорит о ее непригодности.
Выделение бактериофага из патологического материала
Исследуемую жидкость фильтруют от микробов.
Твердый исследуемый материал (почва, пищевые продукты, оформленные испражнения) измельчают в ступке, эмульгируют, фильтруют. Наличие фага в полученном фильтрате определяют в жидких питательных средах или на плотных средах по методу Отто или Грациа.
Обнаружение бактериофага на плотных питательных средах по методу Отто
1,5% МПА разливают в чашки Петри (более высокая концентрация агара угнетает развитие колоний бактериофага). После застудневания МПА засевают 16—18-часовой бульонной культурой бактерий, гомологичных искомому фагу. Для получения сплошного роста посев растирают шпателем. Спустя 5—10 мин после посева на подсушенную поверхность каплями наносят исследуемый фильтрат. Чашки ставят в термостат на 18—24 часа при температуре 37°С.
Нет результатов: доказательством наличия бактериофага служит полное отсутствие роста культуры в месте попадания капли фильтрата (активный бактериофаг) или появление в этом месте мелких стерильных пятен-колоний бактериофага (бактериофаг слабой активности).
Техника фаготшшрования микробов по методу Креджи и Иенсена
В основу фаготипирования положен принцип совместного выращивания типируемой культуры с типовым бактериофагом. Наступление лизиса определяет типовую принадлежность бактерий. Для фаготипирования бактерий применяют 1,5% МПА с 5% глицерина. Пророщенную бульонную культуру каплями наносят на поверхность питательной среды. Капли не должны растекаться. Они должны впитаться в течение 3—10 мин.
Затем на поверхность каждой капли наносят по 1 капле типового фага с таким расчетом, чтобы часть культуры оставалась свободной от воздействия бактериофага (для контроля роста культуры). Чашки помещают в термостат при температуре 37°С: через 6—8 часов производят учет результатов фаготипирования.
Наличие хорошо выраженного лизиса исследуемой культуры с одним из типовых фагов указывает на принадлежность культуры к данному фаготипу.
Приложение 7.4 (справочное)
Средства и методы дезинфекции, используемые при работе с микроорганизмами III—IV групп патогенности
I. Бактерии, не образующие спор
1. Хлорамин Б или ХБ (содержание активного хлора — АХ не менее 26%):
0,5%, 1%, 2%, 3%-е (по препарату) растворы.
2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%):
0,5%, 1%, 2%-е (по препарату) осветленные растворы;
10%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы;
20%-и (по препарату) хлорно-известковое молоко.
3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%):
0,5%, 1%, 2%-е (по препарату) осветленные растворы;
10%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
4. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б):
0,15%-й (по АХ) раствор;
0,25%, 0,5%, 1 %-е (по АХ) осветленные растворы;
5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
5. Гипохлорит кальция технический — ГКТ (содержание АХ не менее 35%):
1%, 1,5%-е (по препарату) осветленные растворы;
5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
6. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%):
0,25 %, 0,5 %, 1 %-е (по препарату) осветленные растворы;
5%-е (по препарату) осветленные и неосветленные растворы.
7. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):
1 %-й (по препарату) осветленный раствор;
8. Гипохлорит натрия (содержание АХ не менее 14%):
1%-й (по АХ) раствор.
9. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза поваренной соли на установках, разрешенных к производству и применению 0,125%, 0,25%-е (по АХ) растворы.
10. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению:
с содержанием 0,03%, 0,05%, 0,06% АХ.
11. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%):
2%, 5%-е (по препарату) растворы.
0,1%, 0,2%-е (по препарату) растворы. 13.Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты — НУ К не менее 5%):
1%, 2%-е (по препарату) растворы.
14. Пергидроль (содержание перекиси водорода 30—35%):
3%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода;
3%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода с 0,5% моющего средства («Прогресс», «Новость», «Астра», «Лотос»);
6%-й (по ДВ) раствор перекиси водорода.
15. ПВК (содержание перекиси водорода не менее 30%):
0,5%, 0,75%, 2%-е (по перекиси водорода) растворы.
16. Пероксимед (содержание перекиси водорода 30% и ПАВ):
3%-й (по перекиси водорода) раствор.
17. Пероксогидрат фторида калия — ПФК-1 (содержание перекиси водорода не менее 30%):
3%, 6%, 7%, 9%-е (по препарату) растворы.
18. Полисепт (содержание полигексаметиленгуанидина хлорида 25%):
1 %-й (по препарату) раствор.
19. Демос (содержащий комплекс катионных и др. ПАВ):
5%, 10%-е (по препарату) растворы.
20. Велтолен (содержание клатрата мочевины с дидецилди-метиламмоний бромида 20%):
1 %-й (по препарату) раствор.
21. Фогуцид (содержание пол игексаметиленгуанидина фосфата 19-25%):
0,5—1 %-е (по ДВ) растворы.
22. Ника-экстра М (содержание алкилдиметил бензил аммоний хлорида 3,5—4,5%):
0,5%, 2%-е (по препарату) растворы.
23. Лизол А (содержание фенолов 50%):
5%-й (по препарату) раствор.
0,5%, 2%-е (по препарату) растворы.
10%-и (по препарату) раствор.
26. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.):
1%-й (по препарату) раствор.
27. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксаль и ка-тамин АБ):
1,5%-й (по препарату) раствор.
28. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%):
готовое к применению средство.
3%, 10%, 20%, 40%-е (по формальдегиду) водные растворы.
30. Аммиак 25% (по ДВ) водный раствор.
Для нейтрализации формальдегида применяется соотношение 1:1.
31.Дихлор-1, Белка, Блеск, Блеск-2, Санита, Дезус и др. бытовые чистяще-дезинфицирующие средства: пасты, порошки и др. формы.
2%-й раствор пищевой соды;
2%-й раствор кальцинированной соды.
33. Обработка водяным насыщенным паром под давлением (автоклавирование).
34. Этиловый спирт 70%, 96%-е, смесь Никифорова.
35. Обработка горячим воздухом — 180°С.
38. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.
39. Аэрозольный метод обеззараживания.
40. Газовый метод (дезинфекция парами формальдегида).
41. Ультрафиолетовое облучение.
1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%):
5%-й (по препарату) раствор;
0,5% и 1%-е (по АХ) активированные растворы.
2. Хлорная известь (содержание АХ не менее 25%):
2—10%-е (по препарату) растворы;
20%-й (по препарату) хлорно-известковое молоко;
0,25 0,5%-е (по АХ) активированные растворы.
3. Известь белильная термостойкая (содержание АХ не менее 25%):
2—10%-е (по препарату) растворы;
0,25—0,5%-е (по АХ) активированные растворы.
4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС ГК (содержание АХ не менее 47%):
20%-ное хлорно-известковое молоко;
1 %-й (по препарату) раствор.
5. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):
6. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52% для марки А и не менее 24% для марки Б):
1 %, 5%-и (по АХ) раствор.
7. Гипохлорит кальция технический — ГКТ (содержание АХ не менее 35%):
2%-й (по препарату) раствор.
8. Гипохлорит натрия, получаемый методом электролиза на установках, разрешенных к производству и применению:
0,25%, 0,5%-е (по АХ) растворы.
9. Анолиты, получаемые на установках, разрешенных к производству и применению с содержанием 0,05,0,09% АХ.
10. Спорокс (содержание АХ не менее 2,5%):
10%-и (по препарату) раствор.
11. ДП-2 (содержание АХ не менее 35%):
0,5%-и (по препарату) раствор.
12. Дезоксон-1 или Дезоксон-4 (содержание надуксусной кислоты — НУК не менее 5%):
0,25%, 0,5%, 1%-е (по НУК) растворы.
13. Пергидроль (содержание перекиси водорода — ПВ — не менее 30%):
14. Пероксимед (содержание ПВ не менее 30% и моющие компоненты):
3 и 4%-е (по ПВ) растворы.
15. ПВК (содержание ПВ не менее 30%):
2,5%-и (по ПВ) раствор.
16. Лизол марки А (содержание фенолов 50%):
0,5%-й (по препарату) раствор.
18. Глутарал или Глутарал Н (содержание глутарового альдегида 2%):
готовое к применению средство.
19. Аламинол (содержит катамин АБ, глиоксаль и др.):
1 %-й (по препарату) раствор.
20. Бианол (содержит глутаровый альдегид, глиоксаль и катамин АБ):
1,5%-и (по препарату) раствор.
2%-й раствор пищевой соды;
2%-й раствор кальцинированной соды.
22. Обработка водяным насыщенным паром.
23. Обработка горячим воздухом — 180°С.
26. Обработка в дезинфекционных камерах: паровоздушный, пароформалиновый методы.
27. Ультрафиолетовое облучение.
Ш. Бактерии, образующие споры
1. Хлорамин Б или ХБ (содержание АХ не менее 26%):
1—4%-е активированные растворы, содержащие 0,25— 1% АХ.
2. Хлорная известь или белильная термостойкая известь (содержание АХ не менее 25%):
20%-и осветленный и неосветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;
4%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.
3. Нейтральный гипохлорит кальция — НГК (содержание АХ не менее 52%):
15%-й осветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;
2%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.
4. Двутретьосновная соль гипохлорита кальция — ДТС, ГК (содержание АХ не менее 47%):
15%-й осветленный раствор, содержащий не менее 5% АХ;
2%-й осветленный активированный раствор, содержащий не менее 1 % АХ.
5. Двуосновная соль гипохлорита кальция — ДСГК (содержание АХ не менее 30%):
4%-й активированный раствор, содержащий не менее 1,2% АХ.
10%-й раствор (70°С).
7. Пергидроль, содержащий 30—35% перекиси водорода (ПВ):
6%-й раствор ПВ с 0,5% моющего средства («Прогресс», «Новость», «Астра», «Лотос»);
3 %-й раствор ПВ с 0,5 % моющего средства при температуре раствора 50°С.
8. ПВК (содержание ПВ не менее 30%):
раствор, содержащий 4% ПВ при температуре 20°С; раствор, содержащий 3% ПВ при температуре 50°С.
9. Пероксимед (содержание ПВ 30% и ПАВ):
3%-й (по ПВ) раствор при температуре 20 и 50°С;
6%-й (по ПВ) раствор.
10. Дезоксон-1 или дезоксон-4 (содержание ПУК не менее раствор, содержащий 1 % надуксусной кислоты (НУ К).
20%, 40% -е (по формальдегиду) водные растворы;
0, 2% -и раствор формальдегида с 0,2% мыла или ОП-10 при температуре 60° С.
15. Сухой горячий воздух.
16. Обработка паром под давлением.
17. Все емкости, в которых проводится обеззараживание, должны быть закрыты крышкой.
18. Обработка в камерах: паровоздушный и пароформали-1 новый методы.
19. Аэрозольный метод обеззараживания.
ВОПРОСЫ для самоконтроля
Какие физические факторы влияют на клетку? Что такое «антисептика» и «асептика» ? Какие вы знаете «антисептики» ? Что такое «симбиоз», «метабиоз» и «антагонизм» ? Что такое «стерилизация»? Назовите физические способы «стерилизации». Где применяется химическая и механическая стерилизация?
Что такое «бактериофаг» ? Структура и морфология фагов. Как используются фаги в медицине?
Источник: http://bib.social/mikrobiologiya_1050/prakticheskaya-chast-73545.html